CIK和NK细胞免疫治疗两个都是细胞免疫治疗,其中NK细胞输注后必须经白介素介导才能发挥作用,CIK细胞不用白介素介导,可以直接杀伤肿瘤细胞,而且安全对身体不会产生任何的伤害,治好的希望也是比较大的。
NKT细胞(Natural killer T cell)是一种细胞表面既有T细胞受体TCR,又有NK细胞受体的特殊T细胞亚群。NKT细胞能大量产生细胞因子,且可以发挥与NK细胞相似的细胞毒作用。NKT细胞表达的是“半恒定的”TCRαβ肽链,意思是指TCRα链相对恒定,而TCRβ链具有多样性。例如,人NKT细胞的TCRα链均表达Vα24/Jα18。
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NK细胞发育成熟的场所不局限于某一单一器官,其在骨髓、胸腺、淋巴结、肝脏、脾脏中均可发育成熟。
①其分化、发育依赖于骨髓及胸腺微环境,主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴结。
②NK细胞不同于T、B细胞,是一类无需预先致敏就能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细胞。
nk细胞是一种杀伤细胞,但在杀伤靶细胞时,它们不需要预先特异性抗体或抗原致敏,所以被称为自然杀伤细胞。在没有任何抗原刺激的情况下,自身释放的非特异性淋巴毒素杀死肿瘤细胞和寄生虫细胞,如病毒。因此,它在免疫监测和抗感染方面发挥着重要作用。自然杀伤细胞由骨髓干细胞分化而来,不依赖胸腺,不含smlg和补体受体,对特异性抗T细胞血清(加补体)敏感。
自然杀伤(NK)细胞:是一类可非特异性直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的固有免疫淋巴细胞。
NK细胞表面标志:①表达IgGFc受体,发挥抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。②细胞表达:TCR-、mIg-、CD56+、CD16+。
功能:
(1)非特异性杀伤作用:NK细胞无需抗原预先致敏,即可通过ADCC作用直接杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染细胞,在机体抗肿瘤、早期抗病毒或胞内寄生菌感染的免疫应答中起重要作用。
(2)分泌细胞因子:NK细胞被IFN-α/β、IL-2、IL-12、IL-15和IL-18等细胞因子激活后,可分泌IFN-γ和TNF-α等细胞因子,增强机体抗感染效应并参与免疫调节。
淋巴细胞包括T细胞、B细胞和NK细胞。从淋巴细胞中选择性分离出均质的特殊淋巴细胞群及亚群,对深入研究免疫细胞的分化过程、生物学特性与功能等具有重要意义。目前采用的分离方法有E花环形成分离法、尼龙毛柱分离法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪分离法等。本试验以E花环形成试验为例。
实验原理:人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体,能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。此试验用于计数T细胞数量,可判断机体细胞免疫状况。由于T细胞的异质性,其对SRBC的亲和力亦不同,因而T细胞可形成不同类型的E花环,其中在4℃放置1 h以上,所形成的花环数代表T细胞总数,称为总花环(Et花环),而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
主要试剂和器材:
1. 肝素抗凝剂 用Hank,s液将肝素配成500U/ml,分装,每管0.1ml,置4℃备用。
2.淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。
3.小牛血清 56℃加热灭活30 min,按2∶1比例与沉积SRBC混合,置37℃30 min后,2000r/min离心20min,收集上清液备用。
4.0.5%SRBC悬液 无菌取绵羊血,脱纤维,或Alsever液保存的绵羊血,用5~10倍量生理盐水洗3次。第3次2500r/min离心10min,弃上清液,用生理盐水配成0.5%SRBC悬液(约108个细胞/ml)。
5.0.8%戊二醛 取4.5g/L NaCl盐水30.25 m1,加入25%戊二醛lml。
6.姬姆萨-瑞氏染液 取磷酸缓冲液10ml,加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。
7.Alsever液 、Hank,s液(无Ca2+和Mg2+,pH7.2~7.4)、1/15mol/L PB(pH 7.0~7.4)、生理盐水。
8.离心机、水浴箱、电冰箱、显徽镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。
NK细胞就是自然杀伤细胞,存在于外周血、脾脏和骨髓中。其免疫活性比K细胞、T细胞要小得多,NK细胞对非特异性杀伤靶细胞的作用发挥迅速,特别是对肿瘤细胞有迅速杀伤和溶解作用;所以NK细胞是一种免疫保护性细胞。检验意义:NK细胞总数正常、活力下降:肿瘤、慢性多发性硬化症、感染性疾病;NK细胞总数、活力均下降:急性多发性硬化症、系统性红斑狼疮。
NK细胞总数及活力的增高是NK细胞对其他癌性细胞及有害免疫细胞的对抗,是一种保护性因素
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