原则缓冲溶液时要保证缓冲溶液的qh值与样品的相同，这样不会改变样品的酸碱度。
缓冲溶液的作用是在一定条件下将溶液pH值稳定在一定的范围内，缓冲溶液指的是由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定
流动相试剂的选择
1.色谱纯。液相色谱仪所用的试剂必须是色谱纯级别的，而且使用之前需要抽滤经过0.45um或者0.22um的微孔滤膜，除去试剂中的细小颗粒和其他杂质，以免溶剂残留的杂质在色谱柱长期累积，降低柱效和寿命。
2.粘度。一般要求流动相的粘度应小于2cp，若使用高粘度溶剂，势必会增高柱压，不利于分离。常用的低粘度溶剂有乙腈、丙酮、乙醇等。
3.溶解性。溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，符合相似相溶的原则，以免样品沉淀在系统中特别是色谱柱中，日积月累降低柱效。
4.溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用的检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。截止波长是指某一个特定的波长,超过这个波长的紫外线,紫外检测器对其几乎不响应,或者说响应很小。对于示差检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，来达到最好的灵敏度。
5.缓冲盐和PH。用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，来抑制样品目标物的解离，增加目标物在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。一般样品溶液是酸性时，会在流动相中加入少量甲酸，醋酸或者磷酸来提高液相的分离度和改善峰形，但一定注意流动相的PH在色谱柱的耐受酸碱度范围内。样品溶液是碱性时则相反。可以根据目标物的pKa来确定pH，根据pH选择缓冲盐的种类，常用的缓冲盐溶液有乙酸铵，磷酸盐，三乙胺等。
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液.弱酸及其盐的混合溶液（如HAc与NaAc）,弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液.
由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故.当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H 离子基本上被A-离子消耗：
所以溶液的pH值几乎不变；当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化.
缓冲液发挥作用,主要是因为弱酸（碱）的电离平衡和弱酸（碱）盐的水解平衡.强酸强碱在水中完全电离,是不能用作缓冲液的.
这种色谱柱使用较少，一般液相色谱柱最好不要反冲，如果色谱柱拖尾或者出现其他问题，首先想到的是使用极性较强的试剂冲洗一个小时或者更长时间，流速设定应视情况而定，如果实在不行再反冲，可以直接使用流动相反冲，35℃，流速应在0.5mL/min以。
有机溶剂主要是起到洗脱的作用，样品能在柱子里完全被洗脱主要还是有机溶剂的作用，而使样品能在柱子里面保留时间延长主要是水相的作用，分离是有机相和水相与柱子的固定相三者的共同作用（分配作用），而水相中的缓冲盐，主要是起到抑制样品解离的作用，使样品成分子状态，峰型较好，一般是酸样加酸，碱样加碱，也就是我们理论上常说的PH要控制在PKA加减2以外。
清洗柱塞杆。
如果流动相用缓冲盐，容易结晶，固体盐对柱塞杆磨损严重。如果仪器安装了Seal wash组件，在运行过程中可使用10％的异丙醇/水冲洗，此时流出的液体最好当做废液，不循环使用；如果所用的流动相不含缓冲盐，则可用10％的异丙醇/水循环使用。10%异丙醇还有助于减小水的表面张力，并有抑菌作用色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。① 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。② 应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。③ 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。④ 选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。⑤ 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。⑥ 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇（乙腈）冲洗时重复注射100~200μl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有机物）、甲醇、水依次冲洗。⑦ 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。⑧ 色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。在后两种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相（与柱内相同）填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后，最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。
可以的。很多反相色谱的流动相里面都有缓冲盐，但是需要注意几点：一定要过滤，一个是确保盐物质溶解，一个是分析纯的盐里面有很多杂质，过滤干净才不会损害柱子。
含盐的流动相一定不要直接碰到纯的有机溶剂。就是说色谱柱里面如果是纯甲醇，用10%的甲醇水过渡一下，然后在换成流动相。
因为盐在水中溶解性很好，在纯有机相里面溶解度很差，容易析晶。如果析出的晶体黏在柱子或者仪器管路里面就完蛋了。
每天用完一定要拿10%的甲醇水或者10%的乙腈水冲洗，1.0ml/min的流速至少30min。
不光是为了过渡有机相，也是为了不让盐留在柱子里面。
方法如下：
洗盐.洗盐就是把水灌到盐碱地里,使土壤盐分溶解,通过下渗把表土层中的可溶性盐碱排到深层土中或淋洗出去,侧渗入排水沟加以排除.
平整土地.平整土地可使水分均匀下渗,提高降雨淋盐和灌溉洗盐的效果,防止土壤斑状盐渍化.
深耕深翻.盐分在土壤中的分布情况为地表层多,下层少,经过耕翻,可把表层土壤中盐分翻扣到耕层下边,把下层含盐较少的土壤翻到表面.翻耕能疏松耕作层,切断土壤毛细管,减弱土壤水分蒸发,有效地控制土壤返盐.盐碱地翻耕的时间最好是春季和秋季.春、秋是返盐较重的季节.秋季耕翻尤其有利于杀死病虫卵,清除杂草,深埋根茬,加强有机质分解和迟效养分的释放,所以值得提倡.
适时耙地.耙地可疏松表土,截断土壤毛细管水向地表输送盐分,起到防止返盐的作用.耙地要适时,要浅春耕,抢伏耕,早秋耕,耕干不耕湿.
增施有机肥,合理施用化肥.盐碱地一般有低温、土瘦、结构差的特点.有机肥经微生物分解、转化形成腐殖质,能提高土壤的缓冲能力,并可和碳酸钠作用形成腐殖酸钠,降低土壤碱性.腐殖酸钠还能刺激作物生长,增强抗盐能力.腐殖质可以促进团粒结构形成,从而使孔度增加,透水性增强,有利于盐分淋洗,抑制返盐.有机质在分解过程中产生大量有机酸,一方面可以中和土壤碱性,另一方面可加速养分分解,促进迟效养分转化,提高磷的有效性.因此,增施有机肥料是改良盐碱地,提高土壤肥力的重要措施.
此外,化肥对改良盐碱的作用也受到人们重视,化肥给土壤中增加氮磷钾,促进作物生长,提高了作物的耐盐力.施用化肥可以改变土壤盐分组成,抑制盐类对植物的不良影响.无机肥可增加作物产量,多出秸秆,扩大有机肥源,以无机促有机.
当然,盐碱地施用化肥时要避免施用碱性肥料,如氨水、碳酸氢铵、石灰氮、钙镁磷肥等,而应以中性和酸性肥料为好.硫酸钾复合肥是微酸性肥料,适合在盐碱地上施用,且有改良盐碱地的良好作用.
是为了调整出峰时间的。如果待检测物质溶解后是阴/阳离子，那么加入酸，缓冲盐以后出峰时间就会提前
版权声明：xxxxxxxxx；
工作时间：8:00-18:00
客服电话
电子邮件
admin@qq.com
扫码二维码
获取最新动态
