贴壁细胞的培养液常用有DMEM和1640,可以从试剂公司买回来,有液体的加抗生素后可以直接使用,也有粉剂,这个就比较麻烦了,还要调PH值。一般1包可以配置1L。用800ML三蒸水或去离子水溶解后,加NAHCO3或HCL调PH至7.0-7.2,最后定容至1L.最后一步就是用0.22微米的滤器过滤除菌,这样就可以直接使用了,同样也要加抗生素。
按现行新课标实验教材选修3应该是如下区别吧????
动物细胞培养,大致的步骤是这样:
1.从动物胚胎或者一些刚出生的动物的器官或者组织上取得细胞,配制成细胞悬浮液.把细胞液放到培养瓶中,在培养箱里培养--------原代培养.
但是,不要以为这样就能一直无限培养下去.
因为细胞在那个瓶壁上生长的时候,如果大量增殖,细胞之间会彼此相碰,细胞细胞就会停止分裂增殖,出现一种接触抑制.
2.我们为了它们能继续增殖,就用胰蛋白酶再把它们分开,然后再配制成细胞悬浮液,分开装到好几个瓶子里继续培养--------传代培养.
细胞株&细胞系
1.它们都是传代培养里面的概念.都是10代以后的
2.细胞株是传代培养里10~50(不同物种不同组织细胞有差别吧)代,细胞系是50代以后的;
3.对于细胞繁殖而言,传到10代就很不容易了,所以细胞株是极少数的细胞
4.50代以后,细胞繁殖会出现另一个危机,基本上没有什么细胞能再传下去了.但是,有细胞发生了基因突变,像一个癌细胞一样无限地分裂下去,这就是细胞系.
培养液是既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多,按其物质状态分为半固体培养基和液体培养基两类;按其来源分为合成培养基和天然培养基。
1. 天然培养基:使用最普遍的天然培养基是血清,基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合志培养基合用,能使细胞硕利增殖生长。常见使用最为 5-20%。
2. 合成培养基:合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。
不同细胞可能长满细胞数是不同的,对于同一种细胞,你可以计数几次,以后就可以大致知道有多少。但是一般做实验种细胞的时候都会计数,虽然不是很准确,这是个精度的问题,但是它保证了基本每次的都在一个数量级,不至于相差太离谱。
一般组织块原代培养时用培养瓶,长出的细胞传代后就可以依个人喜好而定了,用培养瓶或培养皿都可以,只要注意无菌操作都是没问题的。不过个人更偏向于用培养皿,操作更方便些。
细胞工程包括植物细胞工程,动物细胞工程。在植物体细胞杂交中制备原生质体需用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁。在动物细胞工程中,要制备细胞悬液对细胞进行原代培养和传代培养。首先用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将组织细胞分散成单个细胞。原代培养后用胰蛋白质酶处理接触抑制的细胞进行传代培养。
昆虫细胞培养基是昆虫细胞培养的关键,培养基是昆虫细胞赖以生长、增值、分化的重要因素。昆虫细胞对营养的要求较高,往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子。大部分昆虫细胞都利用葡萄糖、果糖或麦芽糖作为主要碳源和能源,不同种类的昆虫细胞对氨基酸有不同的要求,至少有14种必需的氨基酸是细胞本身不能合成而必须由培养基提供的。
细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质,维生素对促进昆虫细胞生长、促进细胞贴附有作用,泛酸、异已酸、乙酸及核黄素等对细胞的存活是有利的,胆碱、吡哆醇、硫胺素、尼克酰胺等可促进细胞增殖,无机盐在培养基中维持昆虫细胞生长的渗透水解乳蛋白(LactalbuminHydrolysate,LH)和酵母提取物(Yeastolate,YL)是昆虫细胞培养基中最常用的添加物,YL是维生素和嘌呤的主要来源,而LH是不定成分氨基酸的主要来源
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