抗菌素经高温灭菌后会被破坏,所以一般是配置成1000X的母液。
如果抗菌素是溶在水里的母液,通过过滤除菌,分装成小管保存在-20°C。如果是溶在乙醇里,可以不必除菌。固体培养基灭菌后在水浴中冷却至50°C后加入抗菌素母液混匀后倒板。
如果是液体培养基,灭菌后单独保存,使用前平衡至培养基使用温度,加入抗生素母液混匀后使用。
以gibco的青霉素链霉素溶液(100x)为例(货号:15140163),含10000IU/ml青霉素,10000ug/ml链霉素,即工作浓度(1x)青霉素、链霉素用量分别为100IU/ml和100ug/ml
培养全能干细胞的培养基是什么动物细胞培养液:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.植物组织培养液的成分:水、无机盐、蔗糖、植物激素(生长素,细胞分裂素)等.干细胞对培养条件要求较高,常用的胚胎肝细胞培养基有mTeSR 1培养基,主要成分有:DMEM、bFGF,EGF、血清、双抗、LIF、谷氨酰胺、二巯基乙醇、非必需氨基酸等。干细胞相关的培养液都必须在5%CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下,细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长。
琼脂的作用是使培养基凝固的,固体培养基琼脂加多了培养基就会变得很硬很干,这样不利于微生物的生长,因为微生物的生长是需要合适的温度湿度条件的,合适的琼脂含量一般要控制在1.3%~2%之间,最多不能超过2%,超过这个浓度,会对细菌的生长造成影响。
VP试验由Voges和Proskauer两位学者创建,故有此学名。它是微生物检验中常用的生化反应之一。其原理为:某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,并进一步将丙酮酸脱羧成为乙酰甲基甲醇,后面在碱性环境下被空气中的氧氧化成为二乙酰,进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合,形成红色的化合物,即VP试验阳性。
1.提前一天将分装好的FBS从—20℃冰箱取出,放于4℃冰箱化冻;
2.在细胞间中将FBS以及其它需要添加的成分(如,丙酮酸钠、抗生素等),按照比例加入DMEM培养基中,作好标签;放入4℃冰箱保存。
配制比例如下:
DMEM(High glucose)/ DMEM培养基(高糖)
谷氨酰胺
50ul
非必需氨基酸
500ul
丙酮酸钠
500ul
B-巯基乙醇
双抗
50ul
血清
7.5ml
LIF
5ul
二、ES细胞培养基
DMEM+15%FBS
2-巯基乙醇
5.5uM
1000X
L-谷氨酰胺
2mM
100X
LIF
1000U/mL
10000X
非必需氨基酸
100uM
100X
双抗
100X
LB培养基,是微生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌,分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基.加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆.
其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。
版权声明:xxxxxxxxx;
工作时间:8:00-18:00
客服电话
电子邮件
admin@qq.com
扫码二维码
获取最新动态