取1克的荧光素钠固体再加99克的水就可以配成了1%的荧光素溶液。
【荧光素】是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。
中文名称:荧光素
中文别名:荧光黄;荧光橙红
分子式:C20H12O5
分子量:332.31
【性状】
荧光素(又称为荧光黄)是一种合成有机化合物,外观为暗橙色/红色粉末,可溶于乙醇,微溶于水。在蓝光或紫外线照射下,发出绿色荧光。在多种应用(如荧光抗体技术)中被广泛用作为荧光示踪物。黄红色至红色粉末,溶于热乙醇、冰乙酸、碳酸碱和氢氧化碱,并显亮绿色荧光,不溶于水、苯、氯仿和乙醚;最大吸收波长493.5、460nm。与碳酸钠(钾)、氢氧化钠(钾)等强碱反应生成荧光素钠(钾),易溶于水,并有强烈绿色荧光(量子效率90%以上)。
【用途】
①吸附指示剂;
②氧化还原指示剂;
③荧光光度分析硫离子;
④滴定氯、溴和碘。
⑤防冻液重要的颜料,可使防冻液呈现出绿色荧光。
⑥化学分析的指示剂;
⑦生物染色剂和化妆品着色剂。
性状:橙红色粉末。无气味。有吸湿性。易溶于水,溶液呈黄红色,并带极强的黄绿色荧光,酸化后消失,中和或碱化后又出现,微溶于乙醇,几乎不溶于氯仿和乙醚。水溶液与血浆等渗。最大吸收波长(水)493.5mm。
分子所处的外界环境,如温度、溶剂、pH、荧光熄灯灭剂等都会影响荧光效率,甚至影响分子结构及立体构象,从而影响荧光光谱和荧光强度。1、温度温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下,随着温度的升高,荧光物质溶液的荧光效率和荧光强度将降低。这是因为,当温度升高时,分子运动速度加快,分子间碰撞概率增加,使无辐射跃迁增加,从而降低了荧光效率。例如,荧光素钠的乙醇溶液,在0℃以下,温度每降低10℃,在荧光效率增加3%,在—80℃时,荧光效率φf为1。2、溶剂同一物质在不同溶剂中,其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下,荧光波长随着溶剂极性的增大而长移,荧光强度也有增强。这是因为在极性溶剂中,π→π*跃迁需要的能量差ΔE小,而且跃迁概率增加,使紫外吸收和荧光波长均向长移,强度也增强。溶剂粘度减小时,可以增加分子间碰撞机会,使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响,一般式温度上升,溶剂粘度变小,因此温度上升荧光强度下降。3、pH的影响当荧光物质本身是弱酸或弱碱时,溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响,这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同,在不同酸度中分子和离子间的平衡改变,因此荧光强度也有差异。在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式,也就有相应的pH范围,一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。苯胺在pH为7~12的溶液中主要以分子形式存在,由于—NH2为提高荧光效率的取代基,故苯胺分子会发生蓝色荧光。但在pH<2和pH>13的溶液中均以苯胺离子形式存在,故不能发射荧光。4.荧光熄灭剂荧光熄灭又称荧光猝灭,是指荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。荧光熄灭剂可以促进这种现象的发生。5.散射光散射光对荧光测定有干扰,尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光,因其波长与荧光波长接近,对荧光测定的干扰更大,必须采取措施消除。
荧光素钠与吲哚菁绿有以下区别:荧光素钠是一种发光剂,主要应用于光化学照相、荧光光度法的分析、光度计的定量分析等领域;吲哚菁绿则是一种生物染料,主要应用于细胞活力、分布和代谢的研究、显微镜下细胞的成像等领域。荧光素钠和吲哚菁绿除了应用领域上存在差异外,它们的光谱性质也有所不同。荧光素钠在紫外光激发时可以发射黄绿色荧光,而吲哚菁绿在蓝色激发下发射绿色荧光。此外,荧光素钠的分子结构比较简单,分子中只含有一个苯环和两个羧基基团,而吲哚菁绿则是由吲哚和菁环两部分组成,分子结构比较复杂。总之,荧光素钠和吲哚菁绿是两种不同的化合物,它们在应用和结构上存在差异。
当荧光物质本身是弱酸或弱碱时,溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响,这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同,在不同酸度中分子和离子间的平衡改变,因此荧光强度也有差异。
在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式,也就有相应的pH范围,一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。
荧光素钠是一种有机化合物,分子式为C20H10Na2O5,橙红色粉末,无气味,有吸湿性;易溶于水,溶液呈黄红色,并带极强的黄绿色荧光,酸化后消失,中和或碱化后又出现,微溶于乙醇;最大吸收波长(水)493.5nm。
分子所处的外界环境,如温度、溶剂、pH、荧光熄灯灭剂等都会影响荧光效率,甚至影响分子结构及立体构象,从而影响荧光光谱和荧光强度。1、温度温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下,随着温度的升高,荧光物质溶液的荧光效率和荧光强度将降低。这是因为,当温度升高时,分子运动速度加快,分子间碰撞概率增加,使无辐射跃迁增加,从而降低了荧光效率。例如,荧光素钠的乙醇溶液,在0℃以下,温度每降低10℃,在荧光效率增加3%,在—80℃时,荧光效率φf为1。2、溶剂同一物质在不同溶剂中,其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下,荧光波长随着溶剂极性的增大而长移,荧光强度也有增强。这是因为在极性溶剂中,π→π*跃迁需要的能量差ΔE小,而且跃迁概率增加,使紫外吸收和荧光波长均向长移,强度也增强。溶剂粘度减小时,可以增加分子间碰撞机会,使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响,一般式温度上升,溶剂粘度变小,因此温度上升荧光强度下降。3、pH的影响当荧光物质本身是弱酸或弱碱时,溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响,这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同,在不同酸度中分子和离子间的平衡改变,因此荧光强度也有差异。在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式,也就有相应的pH范围,一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。苯胺在pH为7~12的溶液中主要以分子形式存在,由于—NH2为提高荧光效率的取代基,故苯胺分子会发生蓝色荧光。但在pH<2和pH>13的溶液中均以苯胺离子形式存在,故不能发射荧光。4.荧光熄灭剂荧光熄灭又称荧光猝灭,是指荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。荧光熄灭剂可以促进这种现象的发生。5.散射光散射光对荧光测定有干扰,尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光,因其波长与荧光波长接近,对荧光测定的干扰更大,必须采取措施消除。
可以用紫外线灯,就是验钞机上那种就可以。
1、硫酸常用配比:
1)5%浓硫酸乙醇或乙酸酐溶液;
2)浓硫酸与甲醇或乙醇等体积混合;
3)15%浓硫酸正丁醇溶液。
2、碘常用配比:
1)0.5%碘的氯仿溶液。
2)碘蒸气:将少许碘晶体放入一密闭的容器内,使之充满饱和碘蒸气,将薄层放入容器片刻或数分钟即显色。有时在容器内放一小杯水增加湿度,可提高显色的灵敏度,可提高显色的灵敏度,在化合物斑点处显黄-棕色。
3、荧光素-溴常用配比:
100 mg荧光素溶于100 mL乙醇中;溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液。
4、硝酸银-氢氧化铵常用配比:
0.1%M 硝酸银溶液和5M氢氧化铵溶液按1:5的比例混合,注意要现做现用。
5、碘化铋钾试剂常用配比:
甲液 0.85g次硝酸铋溶于10mL冰乙酸中,再加水稀释至40mL;乙液 40%碘化钾水溶液.临用时,取甲、乙两液各5mL,加冰乙酸20mL,水60mL,摇匀即可
6、磷钼酸常用配比:
10g磷钼酸溶于100ml乙醇中,淡黄色,久置变为浅绿色,但不会影响使用。
7、香草醛-硫酸常用配比:
香草醛1g溶于100ml硫酸或香草醛0.5g溶于100ml硫酸-乙醇(1:1)溶液。
8、三氯化铁常用配比:
1%-5%三氯化铁的0.5mol/L盐酸溶液。
9、碱性高锰酸钾溶液常用配比:
1.5g高锰酸钾,10g碳酸钾,10%氢氧化钠水溶液1.25mL,再加入200mL水,配制成溶液。
10、三氯化铝常用配比:
1%三氯化铝乙醇溶液,紫外光长波下斑点显黄色荧光。
11、茚三酮常用配比:
茚三酮0.2g溶于乙醇100ml或溶于100ml正丁醇,加乙酸3ml。
12、邻苯二甲酸苯胺常用配比:
苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml以水饱和的正丁醇中。
13、钼酸铵-亚硫酸钠常用配比:
I.5%钼酸铵的1M硫酸溶液;II.5%的亚硫酸钠溶液。
14、硝酸铈铵常用配比:
I.1%的硝酸铈铵的0.2M硝酸溶液;II.1.5g的N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐溶于甲醇、水、乙酸(128ml+25ml+1.5ml)的混合溶剂中,用前将I和II等重混合即可。
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