单染法作用是什么,单染色法的原理

2023-06-17 阅读 351 评论 0

摘要：单染色法的原理PI单染色法原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性。

单染色法的原理

PI单染色法原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性。

PI介绍

3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide

3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘

荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。

单染色法实验原理

简介介绍资料

革兰氏染色剂

革兰氏染色剂是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色剂，1884年由丹麦医师Gram创立。

基本信息

中文名革兰氏染色剂原理三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说应用用来观察细菌的形态

介绍

革兰氏染色剂不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，它可将全部细菌区分别革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。革兰氏染色法的步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。

涂片与单染色法相同。

固定与单染色法相同。

结晶紫染色染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。

碘液媒染染色1分钟，然后水洗并吸干。

酒精脱色用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止（大约半分钟），然后立即水洗，并吸干。

番红复染染色3分钟左右，然后水洗并吸干。

镜检在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌；菌体显红色的为革兰氏阴性菌

特殊染色原理

原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。

步骤：

(一)涂片固定

在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。

(二)染色

在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。

(四)媒染

加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。

(五)水洗，用吸水纸吸去水分

用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

(六)脱色

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。

(七)复染

蕃红染色液染色10 s后，自来水冲洗。

(八)干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

扩展资料

标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：

(1)杀死微生物，固定细胞结构。

(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。

(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。

单染色法的注意事项

简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.例如番红.

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜.

2．干燥：可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤.

3．固定：手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面,以不烫手为宜）.

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l～2min.

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止.

6．干燥

7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色.例如革兰氏染色法. 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）. 　　碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）.媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘（iodine ）是常用的媒染剂.脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精（ethanol）.复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,而且将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的复染液为番红. 1.载玻片固定.在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定. 2.草酸铵结晶紫染1分钟. 3.自来水冲洗,去掉浮色. 4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液. 5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色. 6.用番红染液或者沙黄复染30秒,革兰氏阳性菌仍呈紫色,革兰氏阴性菌则呈现红色.

单染色的要领

当然能染色。棉料一般用活性染料，而棉料本身有很强的吸附能力，不要说50%，就含10%棉料甚至更低都可以染色。

如我们能知道另外50%纤维成份，我们就可以更好的染色。象50%涤纶和50%棉就可以先用分散染涤再染棉；也可以单染棉达到麻灰效果。而含50%再生纤维与棉性质一样可以一起染。

单染色法的原理和作用

纺织面料的单染与双染主要区别还是在面料颜色上，如果这面料是涤纶与棉混纺在一起的话，那必须要二次染色(染好棉以后再去染涤纶，或者倒过来先染涤纶再染棉，这样的方式俗称双染)才能被染成纯色，如果单染的话，这面料的颜色会象麻灰一样的效果出现。

单染色法的操作要点

革兰氏染色法的原理：简单来说：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。

具体来说：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色; 而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

G﹢菌:细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌:肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。