LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求。也可用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)。可分为液体培养基和固体培养基。
LB培养基则是一种近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基 是一种半合成培养基。
半固体
肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基。而LB培养基则是一种近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基。两者都属于半合成培养基。肉膏蛋白胨的培养基主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。而LB培养基的主要成分是胰蛋白胨、酵母提取物和NaCl。高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源[
能
通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0. IMPa (121℃)维持15 ~ 30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。
因此,含糖培养基常用0.05MPa (110℃) 灭菌20 ~ 30min某些对糖类要求更高的培养基,可先将糖过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生,可将这些物质分别灭菌,冷却后再混合;
lb培养基由蛋白胨,酵母膏,nacl组成。首先,蛋白胨是经过胰酶处理过的蛋白,处理后,大分子的蛋白分子量变小,细菌更容易利用,此外,还含有嘌呤,提供生长因子。
如要培养大肠杆菌,其实用普通蛋白胨代替胰蛋白胨是没有问题的。蛋白胨为细菌的生长提供氮源。
其次培养基中的酵母膏酵母提取物主要成分是氨基酸,小肽,核甘酸,b族维生素,主要为细菌提供维生素和微量元素,是细菌生长所必须的。氯化钠在培养基中的作用是维持渗透压,兼能可提供无机盐。
一般用PDA(土豆和糖)培养基在28-35度培养。发面用的干酵母中就有酵母菌。 培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。
一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6。C的冰箱内。 常见培养基有:
1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克, 水 100毫升 在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。
待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。 配方三 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基) 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克 磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基 蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 5.烟草的培养基 在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽 CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化 愈伤组织诱导培养基制备 以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中. 烟草叶片愈伤组织诱导 取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解 剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种 5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同 样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观 察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率. 器官分化及植株再生培养 将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况. 愈伤组织诱导的总体情况 烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而 未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发 生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为 60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植 体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整 个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小. 特殊培养基: 一 选择性培养基 1酵母菌富集培养基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉红0.003% pH4.5 2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02% 二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5% 二 鉴别培养基 EMB培养基,常用于鉴别E.coli 蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g 蒸馏水1000g pH7.2 分离海洋微生物的培养基配方 2216E培养基配方(固体培养基) 蛋白胨 5克 酵母膏 1克 磷酸高铁 0.01克 琼脂 15-----20克 陈海水 1000毫升 煮沸氢氧化纳(5%)的溶液调PH值7.6—7.8
LB 用于一般的用途,扩增细菌.Super Optimal Broth (SOB medium) 强化了营养物质,用于在转染后增加转染效率.Super Optimal broth with Catabolite repression (SOC).是SOB加入葡萄糖以抑制分解代谢,增加生长速度.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L;
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L;
氯化钠(NaCl) 10g/L;
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4,LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求,可分为液体培养基和固体培养基。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。
碳源和能源:酵母提取物,氮源:磷酸盐、蛋白胨,无机盐:NaCl。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。 由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基的配方如下:酵母提取物5g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15~20g、水1000mL、pH 7.4~7.6 。
rba无菌玫瑰红钠琼脂培养基,用于霉菌,酵母菌的培养。蛋白胨在培养基中作为基础营养物质提供菌体生长所需的氮源和氨基酸,葡萄糖提供碳源,磷酸二氢钾是缓冲剂,玫瑰红钠是一种指示剂并能抑制霉菌菌落生长过大而漫延,琼脂是凝固剂。为了玫瑰红钠试验的灵敏性,结果的准确性,所以要重置。
淀粉培养基是由牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、可溶性淀粉、水、琼脂等制作而成的实验器皿。
淀粉培养基制备方法如下:
以18~24h的纯培养物,点接于淀粉琼脂平板(一个平板可分区接种)或直接移种于淀粉肉汤中。
于36±1℃培养24~48h,或于20℃培养5天。
然后,将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中。
立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。
阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。
LB液体培养基主要用于实验室培养细菌,常常在分子生物学中进行广泛的应用,主要的成分:酵母膏5g、胰蛋白陈10g、琼脂15~20g、NaCl10g,双蒸馏水1000mL,pH7.0的环境。制法:将各成分溶于1L的双蒸馏水中,用1mol/L的NaOH进行调节pH,然后经过分装后,0.IMPa灭菌15-20分钟左右的时间。如果有必要的话,也可在培养基中加入0.1%的葡萄糖。在半固体的培养基加入0.4%-0,5%的琼脂。
Lb液体培养基是供微生物、植物、动物组织生长用的养料,一般情况下必须含有碳水化合物、无机盐、含氮物质、维生素、水等。有的还含有抗菌素和色素,用于单种微生物培养和鉴定。Lb液体培养基由于配制的原料偶尔有所不同,所以使用的要求也不同,而贮存保管方面也当然也会稍有不同。一般在受热或者是吸潮之后,就会极易被细菌污染或者是产生分解变质,因此一般必须要注意防潮、避光,而且要在阴凉处进行保存。对一些需严格灭菌的培养基来说,如果需要较长时间的贮存,必须就要放在3~6℃的冰箱内进行保存,否则极易产生变质的情况。
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